L'RNA circolare della telomerasi supera l'mRNA nel ripristinare l'invecchiamento accelerato nelle cellule della progeria

**Perché È Importante** L'invecchiamento cardiovascolare è il principale fattore scatenante di infarto e ictus, e la sindrome di Hutchinson-Gilford Progeria (HGPS) comprime decenni di invecchiamento vascolare nell'arco dell'infanzia. Comprendere come invertire la senescenza endoteliale in questo modello estremo ha implicazioni dirette per il normale invecchiamento. Ricerche precedenti avevano dimostrato che la trasfezione transiente con mRNA lineare codificante la trascrittasi inversa della telomerasi (TERT) poteva parzialmente recuperare le cellule endoteliali HGPS, ma l'mRNA è di breve durata, il che ne limita la durabilità. L'RNA circolare, privo delle estremità libere che le esonucleasi attaccano, teoricamente dura più a lungo e produce proteine in una finestra temporale più estesa.

**Cosa È Stato Studiato** Il team ha generato cellule endoteliali (ECs) da iPSC derivate da pazienti HGPS e le ha confrontate con ECs di controllo provenienti da genitori geneticamente sani. Le HGPS-ECs sono state trasfettate una sola volta con quantità equimolari di mRNA TERT wild-type, mRNA TERT cataliticamente inattivo (CI) o TERT circRNA (1 µg/3–4×10⁵ cells), monitorando poi i risultati da 3 a 28 giorni dopo la trasfezione. Gli endpoint comprendevano morfologia, angiogenesi, captazione di LDL, produzione di ossido nitrico, lunghezza dei telomeri (q-FISH), colorazione SA-β-galattosidasi, morfologia nucleare, espressione genica di marcatori di senescenza/infiammazione, danno al DNA (γH2AX) e salute mitocondriale (ROS, potenziale di membrana).

**Risultati Principali** Per ogni endpoint, il TERT circRNA si è dimostrato superiore all'mRNA TERT lineare. Dal punto di vista morfologico, le HGPS-ECs trattate con circRNA erano più allungate e di area ridotta, simili ai controlli sani. Le cellule positive alla SA-β-galattosidasi sono state ridotte di circa 3 volte dal circRNA rispetto a una riduzione minore ottenuta con l'mRNA e, a 28 giorni dalla trasfezione, le cellule trattate con circRNA mantenevano bassi livelli di β-gal, mentre quelle trattate con mRNA erano tornate verso i livelli delle HGPS non trattate. L'allungamento dei telomeri, confermato da q-FISH, era anch'esso maggiore e più duraturo con il circRNA. I geni di senescenza p16 e p21, la proteina specifica della malattia progerin e le citochine infiammatorie IL-1β, IL-6, IL-8 e MCP-1 erano tutti ridotti in misura più significativa dal circRNA. La generazione di ossido nitrico, la captazione di LDL acetilata e la formazione di reti su Matrigel (segmenti, segmenti principali, lunghezza dei tubuli) sono stati ripristinati a livelli prossimi alla normalità. Il ROS mitocondriale era ridotto e il potenziale di membrana normalizzato in modo più efficace dal circRNA. Il TERT cataliticamente inattivo non ha prodotto alcun beneficio, confermando che è l'attività enzimatica della telomerasi — e non la mera presenza dell'RNA — a determinare questi effetti.

**Implicazioni** Questo studio posiziona il TERT circRNA come un potenziale agente terapeutico a RNA trasformativo per l'invecchiamento vascolare. Una singola dose in grado di fornire settimane di beneficio rappresenta un netto miglioramento rispetto a un regime che richiede iniezioni ripetute di mRNA. Al di là dell'HGPS, l'approccio potrebbe teoricamente essere applicato alla disfunzione endoteliale correlata al normale invecchiamento e alle malattie cardiovascolari. Si tratta inoltre della prima applicazione cardiovascolare e anti-senescenza riportata di RNA circolare terapeutico.

**Limiti** Tutti gli esperimenti sono stati condotti in vitro su cellule derivate da iPSC. Resta ancora da stabilire se il circRNA sopravviva alla somministrazione in vivo e raggiunga concentrazioni tissutali sufficienti senza indurre attivazione immunitaria. La finestra di 28 giorni, pur incoraggiante, non chiarisce se una singola dose sarebbe terapeuticamente sufficiente né con quale frequenza sarebbe necessario risomministrarla.