Le Cellule Mast Senescenti Alimentano l'Inflammaging con Tempeste di Citochine Ampliate

**Perché questo è importante:** I mastociti (MC) sono sentinelle immunitarie innate longeve, stazionate nelle interfacce tra tessuti e ambiente. Mentre la senescenza cellulare nei linfociti e nei macrofagi è stata ampiamente studiata come motore dell'infiammazione cronica legata all'età (inflammaging), i mastociti sono stati in gran parte trascurati in questa letteratura. Questo studio colma tale lacuna con la prima caratterizzazione completa dei marcatori di senescenza e delle conseguenze funzionali nei MC.

**Cosa è stato studiato:** Mastociti derivati dal midollo osseo (BMMC) di topi giovani C57BL/6J sono stati coltivati per un massimo di 12+ settimane per indurre la senescenza replicativa, oppure trattati con LPS batterico per indurre la senescenza da stress. Entrambi i modelli sono stati caratterizzati rigorosamente per i marcatori canonici di senescenza: dimensioni/granularità cellulare tramite citometria a flusso, espressione proteica di p16INK4A e p21CIP1/WAF1 mediante western blot, distribuzione del ciclo cellulare con colorazione Hoechst/Pyronin Y, attività della SA-β-galattosidasi (SA-β-Gal) e proliferazione tramite diluizione di CellTrace Violet. La profilazione metabolica è stata eseguita su un analizzatore Seahorse XF96. Sono stati valutati pannelli di citochine/chemochine del SASP e l'attivazione delle vie di segnalazione (ERK, p38, NFκB, Src). In vivo, topi anziani con deficit di mastociti c-Kit Wsh/Wsh, con e senza ricostituzione di MC, sono stati sottoposti a una sfida acuta intraperitoneale con LPS per misurare le risposte citochinica MC-dipendenti.

**Risultati principali:** Dopo 12 settimane in coltura, i BMMC hanno mostrato un aumento significativo di dimensioni cellulari, granularità, espressione di p16 e p21, attività SA-β-Gal e arresto del ciclo cellulare in G0/G1, con una perdita minima di vitalità. L'analisi metabolica ha rivelato uno spostamento verso la glicolisi e una riduzione della respirazione mitocondriale. Il SASP dei MC replicativamente senescenti era dominato da IL-23, IL-6, VEGF e CCL-2. Paradossalmente, la degranulazione massimale e la secrezione di citochine in seguito alla stimolazione di FcεRI (IgE/antigene) o TLR4 (LPS) risultavano ridotte nei MC senescenti, anche mentre la produzione infiammatoria basale aumentava. La senescenza da stress indotta da LPS produceva burst citochinici transitori ma intensi, accompagnati da arresto del ciclo cellulare e upregulation della β-Gal. In vivo, i topi anziani c-Kit Wsh/Wsh ricostituiti con MC mostravano risposte citochinica peritoneali esagerate alla sfida acuta con LPS, e i MC purificati da animali trattati cronicamente con LPS mostravano una produzione citochinica basale elevata, validando il fenotipo senescente cell-autonomo.

**Implicazioni:** Questi dati collocano i MC senescenti come una distinta popolazione cellulare pro-infiammatoria che contribuisce all'infiammazione cronica di basso grado caratteristica dei tessuti che invecchiano. Il SASP dei MC senescenti — in particolare IL-23 e IL-6 — potrebbe amplificare i circuiti locali e sistemici dell'inflammaging e potenzialmente aggravare condizioni associate all'età come le malattie allergiche, l'aterosclerosi e la fibrosi.

**Limiti:** Lo studio si è basato sul modello BMMC, che riproduce principalmente i MC di tipo mucosale e potrebbe non replicare pienamente la biologia dei MC del tessuto connettivo in vivo. Il modello di ricostituzione in vivo utilizza un background di deficit genetico di MC (c-Kit Wsh/Wsh) che presenta effetti pleiotropici al di là della sola assenza di MC. La validazione negli esseri umani resta ancora da eseguire.