Ibridi ingegnerizzati anticorpo-lectina scatenano le cellule immunitarie contro il cancro bloccando i checkpoint a base di zuccheri

Il blocco dei checkpoint ha trasformato l'oncologia, eppure meno del 20% dei pazienti trattati risponde e un quarto dei responder sviluppa resistenza. Le cellule tumorali presentano comunemente glicani alterati, ricchi di acido sialico, che si legano ai recettori inibitori Siglec presenti sulle cellule immunitarie, formando i "checkpoint glico-immunitari". Questi bersagli si sono rivelati difficili da colpire con i farmaci: gli anticorpi anti-glicano di alta qualità sono scarsi, i ligandi delle lectine sono spesso multipli e poco definiti, e le esche a base di lectine fuse a Fc si legano in modo troppo debole (da µM a mM) per funzionare come terapie.

Gli autori hanno progettato chimere anticorpo-lectina (AbLecs). Utilizzando l'ingegneria Fc "knobs-into-holes", hanno co-espresso le catene pesante e leggera di trastuzumab con Siglec-7-Fc o Siglec-9-Fc, producendo in un'unica coltura molecole eterotrimeriche (T7 e T9). Il braccio anticorpale ad alta affinità ancora la molecola a HER2 sulla superficie cellulare, creando un'elevata concentrazione locale che consente al braccio Siglec, a bassa affinità, di legare i sialoglicani presenti sulla stessa cellula. Gli autori hanno confermato l'assemblaggio mediante SDS-PAGE, western blot e spettrometria di massa, e hanno rilevato temperature di fusione di 55–60 °C.

Le AbLecs hanno legato le cellule HER2+ con un'affinità apparente nel basso range nanomolare, simile a quella di trastuzumab, mentre le sole esche Siglec-Fc si sono legate appena. Le AbLecs con mutazione dell'arginina hanno mostrato un legame più debole di circa 2–3 volte, a indicare che l'interazione con i glicani contribuisce. Le AbLecs hanno bloccato in modo selettivo il legame della rispettiva esca Siglec, quasi fino ai livelli osservati con il trattamento con sialidasi. T7 ha inoltre competuto con un anticorpo per l'epitopo di Siglec-7 su CD43. Un modello computazionale guidato dalla struttura ha stimato che T7 fornisca i domini di legame di Siglec-7 in modo circa 400 volte più efficace rispetto a Siglec-7-Fc, e che sposti Siglec-7-Fc da un legame bivalente a uno prevalentemente monovalente, il che potrebbe interrompere il clustering dei Siglec e la segnalazione inibitoria.

Dal punto di vista funzionale, le AbLecs hanno aumentato la fagocitosi da parte dei macrofagi umani primari e la citotossicità da parte delle cellule NK e dei granulociti oltre quanto ottenuto con trastuzumab, in diversi donatori e linee cellulari. L'attività dipendeva da HER2 e dai recettori Fcγ, e il potenziamento scompariva quando il Siglec bersaglio veniva bloccato o quando i ligandi dei Siglec venivano rimossi con sialidasi, a sostegno di un duplice meccanismo: funzione effettrice dell'anticorpo più blocco del checkpoint glico-immunitario. In un modello murino umanizzato e immunocompetente (Siglec-7/9 e FcγR umani, ortologhi murini eliminati) con metastasi polmonari B16D5-HER2, le AbLecs hanno ridotto il carico tumorale. Gli autori riferiscono che la piattaforma si estende ad altri antigeni (HER2, CD20, EGFR) e a progetti di doppio blocco che combinano il targeting di PD-1/PD-L1, CD47/SIRPα o galectina-9, con sinergia rispetto ai checkpoint già consolidati.

Avvertenze: lo studio è preclinico, il testo fornito è troncato prima dei dati completi in vivo, di combinazione e di doppio blocco, e la sicurezza clinica, la farmacocinetica e l'immunogenicità restano non testate.