Proteína EPS8 controla a saúde mitocondrial e a defesa antioxidante no câncer de próstata resistente a medicamentos

O câncer de próstata é um dos cânceres mais comuns em homens. Muitos pacientes acabam desenvolvendo doença resistente à castração, e até mesmo inibidores potentes do receptor de androgênio, como a enzalutamida, acabam falhando. As células cancerígenas sobrevivem a essa pressão, em parte, ao reprogramar as mitocôndrias, as organelas que controlam a produção de energia, o equilíbrio redox e a adaptação ao estresse. A EPS8, uma proteína adaptadora que regula o citoesqueleto de actina e foi originalmente identificada como substrato do EGFR, está aumentada em células LNCaP resistentes à enzalutamida. Seu papel na regulação mitocondrial e antioxidante, no entanto, era desconhecido.

A equipe utilizou células parentais de câncer de próstata LNCaP e um derivado resistente à enzalutamida (LNCaP-Enz). A linhagem resistente foi produzida por mais de seis meses de exposição a 10 μM de enzalutamida e mantida em 5 μM. A EPS8 foi aumentada com um plasmídeo de superexpressão ou reduzida com shRNA, com controles scrambled, e as células foram analisadas 24 horas depois. As medições foram atividade da SOD, níveis de ATP, coloração com JC-1 para o potencial de membrana mitocondrial, imagens com MitoTracker Green e western blots para proteínas das vias antioxidantes, de dinâmica mitocondrial, de resposta ao estresse, de biogênese e AMPK-mTOR. Os experimentos usaram três réplicas biológicas independentes, analisadas com testes t ou ANOVA com teste de Tukey (p<0,05).

A EPS8 comportou-se como um regulador positivo da capacidade antioxidante. A superexpressão aumentou significativamente a atividade da SOD e as proteínas SOD1 e SOD2, enquanto o silenciamento reduziu significativamente as três. O metabolismo energético se moveu na direção oposta. A superexpressão de EPS8 reduziu significativamente o ATP nas células LNCaP, e o silenciamento de EPS8 elevou significativamente o ATP nas células LNCaP-Enz. As imagens de JC-1 mostraram fluorescência vermelha mais intensa, compatível com maior potencial de membrana mitocondrial, após o silenciamento em ambas as linhagens celulares.

O silenciamento de EPS8 alterou a dinâmica mitocondrial e a sinalização de controle de qualidade tanto nas células LNCaP quanto nas LNCaP-Enz. As proteínas de fusão MFN1 e OPA1 aumentaram e a proteína de fissão DRP1 diminuiu, um perfil associado à fusão. As imagens de MitoTracker Green mostraram padrões de coloração alterados, embora tenham sido avaliadas qualitativamente. Os marcadores da resposta mitocondrial a proteínas mal enoveladas HSP60, LONP1, ATF5 e CEBPβ diminuíram significativamente. O eixo de biogênese SIRT1–PGC-1α–NRF1–TFAM foi significativamente regulado para cima em ambas as linhagens.

O silenciamento de EPS8 também aumentou as razões p-AMPK/AMPK e p-mTOR/mTOR, sem alterar os níveis das proteínas totais. Os autores interpretam isso como um remodelamento complexo da sinalização metabólica, e não uma simples alternância recíproca, já que AMPK e mTOR costumam ser opostos. Em conjunto, os dados sugerem que a EPS8 ajuda as células tumorais a manter defesas antioxidantes e um estado mitocondrial dominado pela resposta ao estresse. Removê-la empurra as células para a fusão, a biogênese e um maior nível de ATP. Não se sabe se isso torna as células mais ou menos sensíveis à enzalutamida.

As ressalvas são substanciais. Todo o trabalho usou linhagens celulares derivadas de LNCaP em cultura, com n=3 e sem dados de animais ou pacientes. Os resultados de imagem foram representativos e qualitativos. Não foram relatados ensaios de resposta a fármacos, viabilidade, ROS ou consumo de oxigênio, de modo que as consequências funcionais continuam sendo inferidas. Os efeitos sobre o ATP não foram mostrados em todas as células e condições, e experimentos de resgate não foram descritos. As conclusões são mecanísticas e geradoras de hipóteses.