Associar um CAR fraco direcionado a glicanos ao CD19 restaura seu poder de destruir o câncer

A terapia com células CAR T anti-CD19 é altamente eficaz contra cânceres de células B, mas tem limites. Ela também atinge células B saudáveis, o que aumenta o risco de infecção. A síndrome de liberação de citocinas e a neurotoxicidade também são preocupações, e, com um único alvo, os tumores conseguem escapar ao perdê-lo. Por isso, os pesquisadores buscam alvos complementares, incluindo açúcares associados a tumores. Eles são difíceis de atingir porque os anticorpos contra carboidratos geralmente são IgM, com pouca maturação de afinidade.

Este estudo construiu um CAR a partir do HH2, um anticorpo IgM que reconhece o CD75s, um N-glicano terminado em ácido siálico com ligação α2,6, produzido pela enzima ST6Gal1. O HH2 marcou células tumorais de amostras de pacientes com linfoma folicular, linfoma de células do manto, linfoma de zona marginal/LLC e muitos casos de LDGCB (DLBCL), além da maioria das linhagens celulares de linfoma. A marcação desapareceu após o tratamento com neuraminidase ou o knockout de *ST6GAL1*, confirmando que o HH2 se liga ao açúcar sialilado. As células B saudáveis expressaram o CD75s em nível mais baixo do que as células malignas.

Um HH2CAR de segunda geração eliminou células de linfoma positivas para CD75s in vitro, e essa eliminação se perdeu em células com knockout de *ST6GAL1*. No entanto, ele provocou pouca degranulação e apenas liberação modesta de citocinas. Em um modelo murino de linfoma de Burkitt, proporcionou um breve controle do tumor e nenhum benefício de sobrevida. As células tumorais recuperadas dos camundongos tinham CD75s marcadamente menor do que as células cultivadas, e as células HH2CAR T não conseguiram eliminar células B primárias, que também têm CD75s fraco. Isso indica forte dependência da densidade do antígeno.

A equipe então usou um desenho combinatório com dois CARs em um único vetor. O HH2 carregava CD3ζ (sinal 1) e o CD19 carregava 4-1BB (sinal 2). A versão com 4-1BB foi escolhida em vez das variantes com CD28, que tiveram desempenho semelhante na eliminação, mas apresentaram uma ligeira desvantagem de produção. As células HH2/CD19CAR T mostraram melhor degranulação, avidez funcional e produção de citocinas do que o HH2CAR, embora inferiores às do CD19CAR, e eliminaram células MAVER-1 que o HH2CAR não conseguia eliminar. As células com knockout de *ST6GAL1* foram menos suscetíveis à combinação do que ao CD19CAR, e as células sem ambos os alvos foram poupadas, sugerindo melhor discriminação de alvos. Em um modelo murino de linfoma de células do manto com JeKo-1, o HH2/CD19CAR igualou o CD19CAR no controle do tumor e na sobrevida (mais de 40 dias), enquanto o HH2CAR trouxe apenas um pequeno benefício.

Esses resultados sugerem que CARs de baixa afinidade, normalmente descartados, podem ser úteis em combinações com lógica de porta. Ressalvas: in vitro, as células B primárias saudáveis ainda foram eliminadas pelo HH2/CD19CAR, portanto a aplasia de células B não é evitada. Os dados in vivo vêm de pequenas coortes de xenoenxertos, e alguns ensaios usaram poucos doadores. A eficácia da combinação foi comparável à do CD19CAR isolado, não superior.