Armadilhas de DNA de Neutrófilos Impulsionam o Envelhecimento das Células Hepáticas e o Acúmulo de Gordura na NASH

A esteato-hepatite não alcoólica (NASH) afeta centenas de milhões de pessoas globalmente e se encontra em um perigoso ponto de inflexão entre a esteatose hepática reversível e a cirrose em estágio terminal ou o carcinoma hepatocelular. Apesar do conhecimento de que a desregulação imunológica e a lipotoxicidade são os principais fatores, os elos mecanísticos permaneceram mal definidos. Este estudo foca em um eixo anteriormente subestimado: as armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) como indutores a montante da senescência de hepatócitos, que por sua vez amplifica a toxicidade lipídica e a fibrose.

Os pesquisadores primeiro validaram a relevância clínica medindo o DNA de dupla fita livre (dsDNA) relacionado a NETs no soro de pacientes com NASH em comparação com controles saudáveis, encontrando elevação significativa. A coloração de tecido hepático para MPO e histona H3 citrulinada (CitH3) — marcadores canônicos de NETs — confirmou o acúmulo de NETs em fígados humanos com NASH. Esses achados foram replicados em dois modelos murinos de indução dietética (CDAA por 10 semanas; MCD por 6 semanas).

In vitro, NETs purificadas derivadas de neutrófilos humanos foram aplicadas a hepatócitos AML-12 e hepatócitos primários de camundongos em concentrações graduadas (100–500 ng/mL). As NETs regularam positivamente, de forma dose-dependente, os marcadores de senescência (p16, p21, p53, GATA4), aumentaram a atividade da SA-β-galactosidase e promoveram o acúmulo de gotículas lipídicas e elevação dos triglicerídeos intracelulares. Para confirmar a causalidade in vivo, camundongos MCD foram tratados com DNase I (2,5 µg/g, 3×/semana da semana 4 à 6) para dissolver as NETs. O tratamento com DNase I reduziu marcadamente os marcadores de senescência de hepatócitos, a esteatose (Oil Red O, conteúdo de TG) e a fibrose (Sirius Red). Uma intervenção senolítica paralela com dasatinib + quercetin (DQ) replicou esses benefícios, confirmando que a senescência é um intermediário necessário pelo qual as NETs impulsionam a progressão da NASH.

Mecanisticamente, o estudo explorou a sinalização Notch como reguladora da formação de NETs. Camundongos knockout específicos para células mieloides do gene RBP-J (Lyz2-Cre; RBPJ flox/flox) apresentaram geração de NETs drasticamente reduzida sob condições de dieta CDAA. O RNA-seq do tecido hepático de camundongos RBPJ-KO versus camundongos CDAA controle, analisado por GO, KEGG e GSEA, revelou supressão de programas gênicos relacionados à inflamação e à senescência. In vitro, a inibição farmacológica da sinalização Notch com o inibidor de γ-secretase DAPT em neutrófilos estimulados com PMA reduziu significativamente a produção de NETs. Os camundongos RBPJ-KO também apresentaram menor deposição lipídica, inflamação e fibrose, confirmando que a sinalização Notch em neutrófilos está a montante da cascata NETs–senescência–lipotoxicidade.

Esses achados estabelecem um novo circuito patogênico: sinalização Notch mieloide → formação de NETs → senescência de hepatócitos → esteatose hepática e fibrose. O direcionamento a qualquer nó dessa cadeia — dissolução de NETs, eliminação de células senescentes ou inibição de Notch em neutrófilos — atenua a NASH em modelos pré-clínicos, sugerindo múltiplos pontos de entrada passíveis de intervenção farmacológica.