O Açúcar da Parede Celular Bacteriana Engana o Exame de Sangue para Fungos em Pacientes Transplantados

Nocardiose é uma infecção oportunista grave causada por *Nocardia* spp., bactérias Gram-positivas relacionadas às micobactérias e que afetam predominantemente indivíduos imunocomprometidos, como receptores de transplante de órgãos. O diagnóstico é notoriamente difícil porque a bactéria cresce lentamente, os sintomas são inespecíficos e as culturas convencionais frequentemente resultam em achados negativos. Para agravar ainda mais a situação, alguns pacientes com nocardiose apresentam resultado positivo no ensaio Fungitell — um exame clínico amplamente utilizado que detecta (1,3)-β-D-glucana (BDG), um polissacarídeo normalmente encontrado apenas nas paredes celulares de fungos — levando os médicos a suspeitar de uma coinfecção fúngica que não existe. Até este estudo, a base bioquímica dessa reatividade cruzada era completamente desconhecida.

A investigação teve início com um paciente do sexo masculino de 67 anos, receptor de transplante renal, que se apresentou com ulceração cutânea, linfadenopatia axilar e abscesso cerebral. Os resultados do Fungitell atingiram 2.326 pg/mL, apesar de culturas fúngicas negativas, PCR 18S negativo e teste de trealose circulante negativo. Uma cultura prolongada identificou, por fim, *Nocardia nova* como o organismo causador. A terapia antimicrobiana adequada resolveu os sintomas, e os níveis de BDG declinaram em paralelo, implicando fortemente a *Nocardia* como fonte do sinal.

Para identificar o antígeno responsável pela reatividade cruzada, a equipe realizou fracionamento sequencial da parede celular de *N. nova*. Bactérias intactas e sedimentos mecanicamente rompidos apresentaram resultado negativo no ensaio Fungitell, sugerindo que a molécula reativa estava oculta em condições normais. Entretanto, a fração arabinogalactana-peptideoglicana (AGP) e, subsequentemente, a arabinogalactana (AG) purificada em si apresentaram a maior reatividade ao Fungitell de todas as frações. De forma crucial, a AG de *Mycobacterium bovis* BCG — um organismo intimamente relacionado — demonstrou reatividade mais de dez vezes inferior em concentrações equivalentes, apontando para uma característica estrutural específica de *Nocardia*. A equipe confirmou que a lise de células imunes foi o gatilho fisiológico: quando macrófagos THP-1 foram infectados com *N. nova*, o meio de cultura tornou-se fortemente reativo ao Fungitell de maneira dose-dependente, reproduzindo as condições in vivo.

A análise estrutural detalhada revelou a diferença fundamental: enquanto a AG de micobactérias contém uma cadeia principal de galactana composta por resíduos alternados de galactofuranose com ligações 5 e 6, substituídos por uma cadeia arabinana, a AG de *N. nova* apresenta adicionalmente resíduos terminais de β-D-glucopiranose (Glcp) ligados ao domínio galactana. Essas unidades terminais de glicose, em sua configuração beta-piranose, são reconhecidas pelo Fator G — a zimogênio serina-protease do caranguejo-ferradura que impulsiona o ensaio Fungitell — mimetizando a assinatura estrutural das β-glucanas fúngicas. A síntese química de fragmentos oligossacarídicos confirmou que um tetrâmero da unidade de repetição trissacarídica (Glcp-Galf-Galf) representa a estrutura mínima suficiente para uma reatividade cruzada robusta ao Fungitell.

Esses achados têm implicações clínicas diretas. Pacientes transplantados com nocardiose apresentam alto risco de receber terapia antifúngica desnecessária, com toxicidade associada, interações medicamentosas com imunossupressores e atraso diagnóstico. Ao identificar definitivamente a base molecular da reatividade cruzada, este trabalho fornece um fundamento racional para o desenvolvimento de imunoensaios específicos para *Nocardia* que possam distinguir a doença bacteriana da fúngica, utilizando potencialmente o epítopo único de galactana glicosilada como alvo diagnóstico.