Carnosol do Alecrim Controla a Inflamação da Polpa Dentária por meio do Bloqueio de RAGE/NF-κB

Pulpite — inflamação dolorosa da polpa dentária — é tradicionalmente tratada pela remoção completa da polpa, sacrificando tecido vital essencial para a função normal do dente. Preservar a vitalidade pulpar enquanto se controla a inflamação é uma necessidade clínica importante ainda não atendida na endodontia, o que motiva a busca por agentes anti-inflamatórios direcionados.

Este estudo investigou o carnosol (CA), um diterpenoide fenólico abundante no alecrim e na sálvia, quanto à sua capacidade de suprimir a inflamação pulpar tanto in vitro quanto in vivo. Células da polpa dentária humana (hDPCs) isoladas de terceiros molares saudáveis ou dentes extraídos por motivos ortodônticos foram caracterizadas por coloração positiva para vimentina e negativa para queratina. As células foram pré-tratadas com CA nas concentrações de 2,5, 5 ou 10 µM por 2 horas antes de um desafio de 6 horas com 1 µg/mL de lipopolissacarídeo (LPS). Ratos Sprague-Dawley foram submetidos à exposição mecânica da polpa e, em seguida, receberam CA tópico (50 µM, 3 µL), veículo DMSO ou nenhum tratamento.

O CA em todas as concentrações testadas mostrou-se não citotóxico, conforme confirmado pelo ensaio CCK-8. O sequenciamento de RNA, validado por qRT-PCR, ELISA e western blotting, demonstrou que o CA suprimiu de forma dose-dependente o mRNA e a proteína de IL-6, IL-1β e TNF-α em hDPCs estimuladas por LPS, com 10 µM de CA restaurando os níveis de citocinas a valores próximos ao basal. As análises de enriquecimento de ontologia gênica (GO) e de vias KEGG dos genes diferencialmente expressos apontaram as vias AGE-RAGE e NF-κB como alvos primários. O CA reduziu o mRNA e a proteína de RAGE de maneira dose-dependente. Em termos mecanísticos, o CA inibiu a fosforilação do NF-κB p65 e bloqueou a translocação nuclear do p65, confirmada por imunofluorescência. Um experimento de chase com cicloheximida demonstrou que o efeito do CA sobre o RAGE é transcricional, e não pós-traducional — o turnover da proteína RAGE foi idêntico com ou sem CA quando a nova síntese foi bloqueada.

O knockdown de RAGE mediado por siRNA reduziu independentemente as citocinas inflamatórias e a translocação nuclear do p65 e, de forma crucial, aboliu os efeitos modulatórios do CA, confirmando que o RAGE é o principal nó upstream por meio do qual o CA atua. No modelo de pulpite em ratos, os animais tratados com CA apresentaram infiltração neutrofílica acentuadamente reduzida, camadas de odontoblastos mais organizadas e vasodilatação mínima em comparação com os controles perfurados não tratados, corroborado pela análise imunohistoquímica.

Esses resultados estabelecem uma estrutura mecanística: o CA regula negativamente o RAGE no nível transcricional, atenuando assim a ativação do NF-κB induzida por ligantes, reduzindo a produção de citocinas pró-inflamatórias e preservando a arquitetura pulpar. Como o RAGE é sabidamente regulado positivamente durante a inflamação pulpar crônica e perpetua o dano tecidual mediado por NF-κB, direcioná-lo com um composto de origem natural e baixa toxicidade representa uma estratégia terapêutica atraente para a terapia de vitalidade pulpar.